锦鲤microRNA-137系统进化、靶基因验证及表达分析
为了探究microRNA-137(miR-137)与锦鲤体色形成的关系,实验对已报道的14种鱼类miR-137前体序列(precursor miR-137,pre-miR-137)进行比对,利用最大似然估计法(Maximum Likelihood Estimate,MLE)构建系统进化树,同时荧光定量 PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分析其在体色发生阶段和不同组织中的相对表达水平,并预测其靶基因,随后对靶基因进行GO和KEGG分析,最后通过荧光素酶实验验证miR-137-3p与靶基因的靶向关系,并分析miR-137-3p与靶基因mRNA的表达变化.结果显示,锦鲤与鲤的pre-miR-137序列相似度最高,且pre-miR-137序列在所有鱼类中具有较高的保守性.对miR-137靶基因进行GO和KEGG分析,多个靶基因富集在色素沉积、色素细胞分化等信号通路.定量结果显示,锦鲤出膜后11 d(day post hatching,dph)miR-137-3p表达量达到最高,随后显著降低;miR-137-3p在锦鲤不同组织中均有表达,在眼和肌肉中表达量较高,在皮肤和鳍条等色素细胞存在的组织中也有较高表达,且白色组织表达量显著高于红色组织.荧光素酶实验结果显示,miR-137-3p可结合在mitfa3'-UTR上并抑制其表达,但对sprb并无显著抑制作用;miR-137-3p与mitfa和sprb在不同发育阶段存在显著负相关,但在组织中不存在相关性.本研究发现,miR-137在鱼类进化过程中高度保守,与锦鲤体色形成具有一定的相关性,且可靶向调控mitfa参与体色的形成,以上结果为进一步探讨miR-137在锦鲤体色形成中的作用提供基础数据.
锦鲤、miRNA-137、进化、表达、靶基因、体色
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Q786;S917.4(基因工程（遗传工程）)
国家自然科学基金;河南省科技攻关计划
2021-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共15页
831-845
