半滑舌鳎两种leptin基因的体外重组表达和生物活性分析

摘要：

根据半滑舌鳎lepa和lepb编码氨基酸序列合成开放阅读框ORF肽段.利用原核表达载体pEQ30成功构建了半滑舌鳎lepa/pQE30和lepb/pQE30重组质粒,分别转化至大肠杆菌M15后,经IPTG诱导获得了N端含6个组氨酸的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白.获得的重组蛋白大小均为16 ku,37°C下用0.5 mmol/L的IPTG诱导4 h后目的蛋白表达量最高,主要以包涵体形式存在.检测半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白浓度分别为0.3和0.25 mg/mL.Western blot免疫印迹和质谱分析表明,获得的LepA和LepB重组蛋白均具有免疫活性且序列正确.Ni2+-NTA亲和层析柱纯化可获得高纯度的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白.离体孵育实验表明,获得的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白能显著抑制半滑舌鳎下丘脑lepa、lepb和gnrh3 mRNA的表达水平,表明获得的重组蛋白具有明显的生物活性.研究结果可为探究leptin在半滑舌鳎生长发育中的调控机制提供重要参考.

关键词：半滑舌鳎、leptin、原核表达、生物活性

所属期刊栏目：43

分类号：Q786;S917.4(基因工程（遗传工程）)

资助基金：山东省重点研发计划2018GHY115044;山东省支持青岛海洋科学与技术试点国家实验室重大科技专项2018SDKJ0303-1,2018SDKJ0501-2;中国水产科学研究院基本科研业务费专项2019GH15;海水鱼产业技术体系专项CARS-47;农业农村部"一带一路"沿线热带国家水产养殖科技合作项目

在线出版日期：2019-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：2279-2289