黄颡鱼甘露糖受体基因的克隆和功能分析

摘要：

甘露糖受体(MR)隶属凝集素超家族,主要表达于巨噬细胞和未成熟的树突状细胞表面.MR不仅在先天免疫防御中发挥重要作用,还通过参与抗原呈递,激活T淋巴细胞,启动获得性免疫应答过程.本研究采用同源克隆技术获得黄颡鱼甘露糖受体(pfMR)基因,采用荧光定量PCR技术检测MR在正常黄颡鱼体内的分布情况,采用鲖爱德华菌感染黄颡鱼头肾巨噬细胞和甘露聚糖封闭MR方法研究黄颡鱼MR在抗细菌感染中的作用.结果显示,pfMR同团头鲂、草鱼、斑马鱼和尼罗罗非鱼的MR聚为一支.pfMR在所检测的12个组织中均有分布,其在肾脏、脾脏和肌肉组织中表达量较高,在血液中表达量较少.鲖爱德华菌感染黄颡鱼头肾巨噬细胞后,pfMR、IL-1β和TNF-a均被细菌诱导表达,超氧阴离子和一氧化氮的含量也上升,超氧阴离子在感染30 min后即显著上升,一氧化氮在感染12 h后才显著上升.甘露聚糖竞争结合MR,显著抑制巨噬细胞内化GFP标签的鲖爱德华菌,加入EDTA减少内化的荧光强度,加入Ca2+使内化的荧光强度回升.研究表明,黄颡鱼头肾巨噬细胞MR参与鲖爱德华菌的识别和内吞过程,而且依赖Ca2+.

关键词：黄颡鱼、甘露糖受体、鲖爱德华菌、超氧阴离子、一氧化氮

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分类号：Q785;S965(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金31372563,31572657,31502199;中央高校基本科研业务费专项2014PY035,2662015QC019;湖北省科技支撑计划2015BBA228,YSF2015000255;农业部渔用药物创制重点实验室开放课题201401;广东省海洋与渔业局基金A201512C003, 2015-115;武汉市科技局基金2016020101010089National Natural Science Foundation of China31372563, 31572657, 31502199;The Fundamental Research Funds for the Central Universities2014PY035, 2662015QC019;Special Fund for Science and Technology from Hubei Province2015BBA228,YSF2015000255;Fund from Key Laboratory of Fishery Drug Development, Ministry of Agriculture201401;Special Funds from the Administration of Ocean and Fisheries of Guangdong ProvinceA201512C003,2015-115;Fund from Wuhan Science and Technology Bureau2016020101010089

在线出版日期：2017-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1036-1043