杂交鳢(斑鳢♀×乌鳢♂)弹状病毒TaqMan 实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要：

为了建立一种能在临床上快速、准确检测杂交鳢弹状病毒(HSHRV)的TaqMan实时荧光定量PCR方法,利用PCR技术扩增HSHRV-C1207 G蛋白的全长序列,构建重组质粒,作为荧光定量PCR的标准品,根据HSHRV-C1207 G蛋白的保守序列,设计合成了一对能特异性扩增143 bp片段的引物和TaqMan探针,以标准品为模板建立HSHRV的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的灵敏度、可重复性和特异性进行评价.结果显示:建立的荧光定量PCR检测方法标准曲线有较好的线性关系,相关系数(R2)为0.999,斜率为-3.290;荧光定量PCR最低可以检测到10个病毒核酸分子拷贝,而传统PCR方法最低可检测到1×103个拷贝;38个平行样品重复性实验组内变异系数为0.84％;对其他6种水产养殖常见病毒均无扩增反应.应用该方法对采集的21份患病鳢样品进行检测,其中18份为阳性,与细胞分离和电镜观察结果相同;以传统PCR方法检测同样的样品,仅13份为阳性.本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,能较好的用于临床HSHRV的检测,对病毒病原定量检测与杂交鳢弹状病毒病的快速诊断具有重要意义.

关键词：杂交鳢、弹状病毒、G蛋白、TaqMan real-time PCR、检测方法

所属期刊栏目：38

分类号：S941(水产保护学)

资助基金：国家科技支撑计划2012BAD25B02;现代农业产业技术体系建设专项CARS-46

在线出版日期：2014-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：136-142