冷藏对虾中腐败希瓦氏菌活菌EMA-qPCR检测方法的建立

摘要：

[目的]将叠氮溴乙锭(EMA)与实时荧光PCR技术相结合,建立快速检测腐败希瓦氏菌活菌的方法.[方法]用不同浓度的EMA和作用时间优化对腐败希瓦氏菌活菌的EMA-qPCR检测方法.研究该方法对活菌的最低检出限及能抑制死菌DNA扩增的最高浓度.研究该检测方法对不同比例死、活腐败希瓦氏菌的检测效果.用10株不同细菌验证该方法的特异性.检测101尾冷藏南美对虾中的腐败希瓦氏菌,并用平板培养法和qPCR方法对结果进行验证.[结果]EMA-qPCR检测最优方法为用终浓度20μg/mL的EMA处理细菌20 min.建立的EMA-qPCR法能够最低检测活菌的浓度为1 CFU/反应,能有效抑制1.0×107 CFU/反应腐败希瓦氏菌死菌细胞DNA的扩增.对于死活混合菌,EMA-qPCR能够选择性扩增活菌DNA.该检测方法特异性良好.EMA-qPCR、平板培养和qPCR分别在16、12和19尾对虾中检测到腐败希瓦氏菌.[结论]EMA-qPCR检测技术能够快速、准确的区分腐败希瓦氏菌死菌和活菌,可作为水产品中腐败希瓦氏菌活菌的新检测方法.

关键词：腐败希瓦氏菌、活菌检测、叠氮溴化乙锭、实时荧光定量PCR、南美白对虾

所属期刊栏目：37

分类号：Q939.94;R378.99(微生物学)

资助基金：四川省教育厅项目14ZB0010

在线出版日期：2019-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：247-252