板栗过氧化氢酶基因CmCAT的克隆与原核表达

摘要：

[目的]旨在克隆板栗CmCA T基因全长cDNA序列,分析其编码蛋白相关信息并进行原核表达研究.[方法]采用RT-PCR技术从板栗品种"石丰"中克隆获得CmCA T基因,用生物信息学方法对获得的cDNA序列及推定的氨基酸序列进行分析.构建原核表达载体pET28a-CmCA T,经PCR和酶切鉴定后转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达.[结果]板栗CmCA T基因开放阅读框(ORF)为1479 bp,共编码492个氨基酸,推测蛋白分子质量为56.883 kDa,理论等电点pI为5.83,GenBank登录号为KY312851.其核苷酸序列与核桃(Juglans regia)CAT基因序列相似性最高,为85％.遗传进化分析表明,板栗CmCAT与核桃的亲缘关系最近.SDS-PAGE电泳分析表明,在30℃条件下,0.2 mmol/L IPTG诱导6 h表达量最佳,诱导的目的蛋白分子量约为60 kDa,其主要以包涵体的形式存在.[结论]成功克隆了板栗CmCA T基因,并对其编码蛋白的理化性质进行了预测分析,在大肠杆菌中获得了大量的表达,为其进一步的生物学功能研究奠定了基础.

关键词：板栗、过氧化氢酶、基因克隆、原核表达

所属期刊栏目：37

分类号：S763;Q786(森林保护学)

资助基金：国家自然科学基金31400547

在线出版日期：2019-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：168-176