牛抵抗素克隆及高效可溶性表达研究

摘要：

[目的]抵抗素(resistin,RETN)在机体脂糖代谢和促炎过程中都发挥着重要作用.获得有活性、高效表达的可溶性牛抵抗素并鉴定其正确性,以期为后续其相关疾病的研究和防治奠定基础.[方法]以肉牛大网膜脂肪组织为原料提取总RNA,经RT-PCR获得目的基因,克隆至原核表达载体PET-21a中,构建重组表达质粒PET-Resistin.经双酶切及测序鉴定正确后,对宿主菌、IPTG浓度、诱导温度及时间进行优化,用抗His抗体鉴定融合蛋白表达正确.[结果]在宿主菌Rosetta,IPTG终浓度1.0 mmol/L,20℃诱导14 h时,牛抵抗素的表达量最高;在上述条件下,牛抵抗素存在于上清液中,为可溶性表达.[结论]成功克隆表达出仅含His标签的可溶性牛抵抗素,为进一步研究牛抵抗素参与相关疾病的调控途径和防治奠定了基础.

关键词：牛抵抗素、原核表达、条件优化、基因克隆

所属期刊栏目：36

分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划项目2018YFD0501800;四川省科技计划项目18ZDYF3215

在线出版日期：2019-03-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：802-807