花生光敏色素 AhphyA 和AhphyB 基因的克隆及原核表达研究

摘要：

【目的】克隆了花生（Arachis hypogaea L．）的2个光敏色素基因，并对其进行生物信息学分析，构建这2个基因的原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达蛋白，为进一步纯化蛋白制备抗体以及研究这2个基因在花生发育中的作用奠定基础。【方法】首先，根据花生转录组中编码光敏色素 A 基因与光敏色素 B 基因的部分序列，以花生叶片中提取的总 RNA 为模板，通过 RT-PCR 与 RACE 技术对这2个基因的全长 ORF 序列进行克隆；然后，使用 MEGA软件分析花生光敏色素与其他物种中光敏色素的亲缘关系；构建 AhphyA、AhphyB 的原核表达载体，转化大肠杆菌 BL21并诱导蛋白表达。【结果】2个基因全长 ORF 分别为3378 bp 和3456 bp，分别编码1125和1151个氨基酸的蛋白；其氨基酸序列与大豆的光敏色素 A 蛋白和光敏色素 B 蛋白的相似性分别为88％和90％；经 SDS-PAGE 检测，在大肠杆菌中 2个基因均能受 IPTG 诱导表达产生蛋白。【结论】利用 RT-PCR 与 RACE技术从花生中克隆得到了 2个光敏色素基因，成功构建了原核表达载体，并使其在大肠杆菌中得到了高效表达。

关键词：花生、光敏色素、基因克隆、原核表达

分类号：S565.2(经济作物)

资助基金：国家自然科学基金31471526；山东省博士基金BS2013SW006；山东省生物资源创新项目和山东省“泰山学者”基金tshw20100416。

在线出版日期：2015-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：13-21