尼罗罗非鱼CD2-like基因克隆及其胞外区表达研究

摘要：

依据数据库中预测的尼罗罗非鱼白细胞分化抗原2(CD2)基因(GenBank登录号:XM_005460661.4)序列,采用PCR扩增体质量(150±50)g尼罗罗非鱼CD2分子同源类似物(CD2-like)基因编码区片段,然后以其胞外区构建原核表达质粒pGEX-6P1-CD2L,并进行原核表达及条件优化,最后进行复性纯化,为进一步研究该CD2-like分子在罗非鱼中的免疫功能奠定基础.研究结果表明,罗非鱼CD2-like(OnCD2-like)基因(GenBank登录号:MN296489)编码区全长1110 bp,其中胞外区长558 bp.构建OnCD2-like胞外区的原核表达质粒pGEX-6P1-CD2L,将该重组质粒导入大肠杆菌BL21后,成功表达O nCD2-like胞外段重组蛋白.原核表达结果显示,目的蛋白分子质量为20 ku,主要以包涵体形式存在,而该包涵体蛋白复性纯化最佳条件为:37℃下,0.2 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6 h,经梯度稀释复性并纯化后可成功获得目的重组蛋白.

关键词：尼罗罗非鱼;CD2-like基因;基因克隆;原核表达

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分类号：Q959.4(动物学)

资助基金：国家自然科学基金青年基金资助项目;广东省科技厅国际科技合作领域项目;广东海洋大学2019年"冲一流"省财政专项资金建设项目;广东海洋大学大学生创新创业训练计划项目

在线出版日期：2021-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：700-709