日本七鳃鳗毒素肽rLj-RGD3突变体rLj-115基因的克隆与表达

摘要：

rLj-RGD3是一种含有3个RGD模体的七鳃鳗毒素蛋白,具有抗血栓和抗肿瘤功能.为研究3个RGD模体与其蛋白功能的关系,rLj-RGD3系列突变体的获得成为关键.rLj-115是第Ⅰ及第Ⅱ位RGD缺失、第Ⅲ位RGD保留的突变体,本研究针对其进行了基因克隆、蛋白表达及纯化.由于rLj-RGD3基因具有大量重复序列,突变体基因无法通过定点突变方法获得,故对该突变体基因进行人工合成及PCR扩增、Nde工和HindⅢ双酶切,并构建于pET23b质粒.DNA测序结果显示,该重组质粒所构建序列正确.进一步对阳性重组子进行转化、诱导表达和亲和层析纯化,得到了纯化的rLj-115蛋白.rLj-115作用于人脐静脉内皮细胞ECV304的MTT试验结果表明,该合成基因表达的蛋白具有活性,可以用于后续研究.

关键词：日本七鳃鳗、RGD毒素肽、基因克隆、诱导表达、重组蛋白

所属期刊栏目：38

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家“863”项目2014AA093502;大连市科技攻关项目2014E12SF067;辽宁师范大学大学生创新创业训练计划项目cx201802055

在线出版日期：2019-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：868-873