齐口裂腹鱼PGC-1α 超表达及干扰慢病毒载体构建

摘要：

利用基因重组方法构建齐口裂腹鱼PGC-1α超表达和干扰慢病毒载体,为最终阐明PGC-1α调控齐口裂腹鱼肌纤维类型转化的分子机理提供重要基础.根据GenBank上登录的齐口裂腹鱼PGC-1α基因序列(GenBank登录号为JN195738)设计引物,经过PCR扩增、双酶切、连接来构建PGC-1α超表达和干扰的慢病毒核心质粒,然后将其与穿梭质粒及包装质粒共同转染293 T细胞包装成病毒颗粒,感染体外培养的C2C12成肌细胞,利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测PGC-1α在被超表达和干扰表达慢病毒载体感染C2C12成肌细胞72 h后的表达水平,确定其超表达及干扰效果.重组质粒FUGW-PGC-1α-RFP及PsicoR-PGC-1α-GFP测序验证成功,包装后感染C2C12成肌细胞经qPCR检测后结果显示,超表达组PGC-1α基因表达水平极显著高于对照组(P<0.01),而转染shRNA1组及shRNA2组的PGC-1α基因表达水平极显著低于对照组(P<0.01),证明该基因被成功超表达和干扰.成功构建齐口裂腹鱼PGC-1α超表达及干扰慢病毒载体,为进一步研究该基因在成肌细胞分化中的作用提供重要的基础数据.

关键词：齐口裂腹鱼、成肌细胞、PGC-1α、慢病毒、载体构建

所属期刊栏目：37

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31201990;四川省应用基础研究项目2014JY0088

在线出版日期：2018-12-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：781-786