橡胶树蛋白激酶HbBIN2基因的克隆、蛋白表达纯化及酶活分析

摘要：

橡胶树是天然橡胶的唯一材料来源.寒害是橡胶树面临的主要自然灾害之一,严重限制了橡胶树的生长发育和种植区域分布,克隆和鉴定橡胶树低温应答基因尤为重要.蛋白激酶BIN2(brassinosteroid insensitive 2)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在调控植物应对低温胁迫中发挥重要作用,但橡胶树蛋白激酶HbBIN2还未被克隆与鉴定.本研究从橡胶树cDNA中成功克隆出HbBIN2,序列分析表明:HbBIN2的开放阅读框为1143 bp,编码380个氨基酸,蛋白的分子量为42.9 kDa,理论等电点为8.74,是亲水性蛋白且无跨膜结构域.将HbBIN2构建到原核表达载体pET28a上,转化大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株,摸索合适的诱导条件后成功诱导表达出HbBIN2蛋白.比较HbBIN2在不同的诱导温度(16、28、37℃)、诱导时间(3、6、12 h)和IPTG浓度(0.1、0.3、0.5 mmol/L)下的表达量,结果表明,HbBIN2在37℃,0.3 mmol/L IPTG诱导12 h的表达量最大.对HbBIN2蛋白体外纯化条件进行探索,结果表明,100 mmol/L咪唑能将目的蛋白完全洗脱.纯化HbBIN2蛋白并进行激酶活性鉴定,结果表明,该蛋白具有激酶活性.该研究为后续HbBIN2蛋白功能分析和橡胶树应对低温胁迫的调控机制研究提供参考,为橡胶树耐寒品种分子育种提供重要的基因资源.

关键词：巴西橡胶树、低温胁迫、BIN2、蛋白纯化、激酶活性

所属期刊栏目：43

分类号：S794.1(森林树种)

资助基金：国家自然科学基金;海南省自然科学基金

在线出版日期：2022-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1965-1971