EaDREB2B互作蛋白的筛选及分析

摘要：

甘蔗(Saccharum officinarum)是我国重要的糖料作物之一,90％以上的食用糖是由甘蔗产生的,我国有85％以上的甘蔗种植区是分布在旱地,干旱是限制甘蔗生产重要的因素之一.因此,改良和培育抗旱甘蔗新品种对甘蔗产业的发展具有重要意义.AP2/ERF转录因子是植物中特有的基因家族之一,该基因家族成员通过调控逆境胁迫相关基因的表达,从而在植物的干旱、盐害、冷冻等非生物胁迫中发挥重要作用.前期研究表明斑茅转录因子EaDREB2B在近缘种甘蔗中异源表达可提高甘蔗的抗旱性,但EaDREB2B在甘蔗中的互作蛋白有待挖掘,其调控甘蔗抗旱的分子机制尚待阐明.本研究在前期研究基础上,构建了干旱胁迫下转EaDREB2B基因甘蔗GN18的酵母cDNA文库,拟利用生物信息学和酵母双杂交技术筛选EaDREB2B的互作蛋白,为阐明EaDREB2B调控甘蔗抗旱的分子机制奠定基础.结果 表明:EaDREB2B编码325个氨基酸,含有一个位于N端71～129氨基酸区域的AP2保守结构域,EaDREB2B存在转录激活活性,其自激活区位于EaDREB2B的C端255～325氨基酸区域;利用截短的EaDREB2B(1～255氨基酸)作为诱饵蛋白在甘蔗酵母cDNA文库中筛选其互作蛋白,初步筛选出498个候选阳性克隆,通过PCR检测筛选到432个有效阳性克隆,经测序和比对去除重复克隆后,成功筛选出269个与EaDREB2B互作的候选蛋白,候选互作蛋白主要包括转录因子、泛素蛋白酶、乙烯不敏感蛋白、脱水诱导蛋白、核糖体蛋白、延伸因子、解旋酶、蛋白激酶和一些未知蛋白等.通过KEGG功能分析显示,162个候选蛋白被KEGG注释,并且参与44条KEGG信号通路,主要涉及泛素介导蛋白水解、光合作用、核糖体、氨基酸的生物合成、半胱氨酸和蛋氨酸、调节自噬、内质网中的蛋白质加工、碳代谢和RNA转运等通路;通过KEGG富集分析发现互作蛋白在光合作用、泛素介导蛋白水解和氨基酸生物合成等途径显著富集,推测EaDREB2B可能通过其相互作用蛋白泛素化介导蛋白降解参与逆境响应,推测EaDREB2B可能通过蛋白泛素化介导蛋白降解参与逆境响应.

关键词：EaDREB2B;甘蔗;干旱;酵母双杂;蛋白互作

所属期刊栏目：43

分类号：S961.6(水产养殖技术)

资助基金：国家糖料产业技术体系项目No.CARS170-109

在线出版日期：2022-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：51-59