柑橘黄龙病可视化LAMP检测技术的建立及应用

摘要：

建立柑橘黄龙病(HLB)可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法,为HLB的快速检测提供有力的技术支持.根据LAMP技术原理,针对柑橘黄龙病菌16S rDNA靶序列的6个位点设计4条特异性引物,通过对反应体系和反应条件的优化,并在反应前的体系中加入1∶10的钙黄绿素(calcein)和氯化锰(MnCl2)混合液作为荧光显色剂,建立可视化LAMP检测技术,同时对该技术的特异性、灵敏度和样品检测进行了测试.该检测方法具有很高的特异性,反应体系中除了HLB具有特异性的扩增,产生黄绿色荧光扩增产物,其他供试菌株均无特异扩增.对柑橘黄龙病菌总DNA的检测限为1.51×1O-3 ng/μL,而对含有目的基因的CG-pMD18-T质粒DNA的检测限为2.12×10-6 ng/μL,与定量PCR灵敏度相当,而比常规PCR灵敏度高1 000倍.利用可视化LAMP技术和定量PCR对来自漳州、南平、福州等地的样品进行检测,结果2种技术的检出率均为76.7％,符合率达到100％.

关键词：柑橘黄龙病菌、钙黄绿素、环介导等温扩增(LAMP)、可视化

所属期刊栏目：35

分类号：S436.66(病虫害及其防治)

资助基金：公益性行业农业科研专项“柑橘黄龙病和溃疡病综合防控技术研究与示范”201003067-05;福建省农业科学院博士科研启动基金“柑橘感染黄龙病后种子带菌及传病性研究”2011BS-1

在线出版日期：2014-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：918-924