Rictor/mTORC2介导AKT通路影响血管瘤内皮细胞增殖和迁移的机制研究

摘要：

目的 探讨雷帕霉素不敏感性伴随蛋白(Rictor)/雷帕霉素复合物2(mTORC2)对血管瘤内皮细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的作用及机制.方法 取对数生长期的血管瘤内皮细胞,设置空白对照组、阴性对照(si-NC)组和Rictor沉默(si-Rictor)组.实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)验证转染效率;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定细胞增殖活性;抗凝血蛋白膜粘连蛋白-5/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)法检测细胞凋亡情况;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移、侵袭情况;Western blotting法检测丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达水平;采用25 μmol/L AKT抑制剂MK2206处理Rictor沉默组细胞(si-Rictor+MK2206组),检测AKT、p-AKT蛋白表达水平和细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况.结果 血管瘤内皮细胞中Rictor mRNA表达显著高于人脐静脉内皮细胞,差异有统计学意义(t=121.510,P＜0.05).与si-NC组比较,si-Rictor-1、si-Rictor-2和si-Rictor-3组RictormRNA的表达均显著减少,差异均有统计学意义(t=9.564、10.760、22.105,P均＜0.05),其中si-Rictor-3组的沉默效果最好;因此,本次实验选择以si-Rictor-3作为干扰序列继续进行后续实验.si-Rictor组在3个时间点(48、72、96h)细胞增殖能力显著低于si-NC组,差异均有统计学意义(t=3.872、6.560、18.469,P均＜0.05);细胞迁移、侵袭能力显著弱于si-NC组,差异均有统计学意义(t=6.260、4.739,P均＜0.05);细胞凋亡率显著高于si-NC组,差异有统计学意义(t=19.624,P＜0.05);p-AKT的蛋白表达显著高于si-NC组,差异有统计学意义(t=8.981,P＜0.05).MK2206处理细胞后,与si-Rictor组比较,si-Rictor+MK2206组细胞p-AKT的蛋白表达显著下调,差异有统计学意义(t=5.399,P＜0.05);细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加,凋亡显著减少,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 Rictor/mTORC2在血管瘤细胞中高表达,沉默Rictor抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,可能与AKT信号通路的激活有关.

关键词：Rictor、mTORC2、磷酸化AKT、血管瘤、增殖、转移

所属期刊栏目：23

分类号：R732.2(肿瘤学)

资助基金：大学生创新创业训练项目20201016009

在线出版日期：2023-08-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：780-784,792,后插1