10.3969/j.issn.1672-3619.2023.06.006
LncRNA NNT-AS1对肺癌细胞行为的分子机制
目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)烟酰胺核苷酸转氢酶反义RNA1(NNT-AS1)在非小细胞肺癌(NSCLC)进展中的潜在机制.方法 30例NSCLC组织和癌旁正常组织获自于2020年6-12月在空军军医大学第二附属医院接受手术切除的NSCLC患者,NSCLC细胞系H1650、A549、H1299、H2170以及人肺上皮细胞BEAS-2B常规培养.将A549细胞分为siRNA阴性对照(si-con)组、靶向NNT-AS1的siRNA(si-NNT-AS1)组、miR-142-3p抑制物阴性对照(si-NNT-AS1+in-miR-con)组、miR-142-3p 抑制物(si-NNT-AS1+in-miR-142-3p)组、锌指 E 结合蛋白 1(ZEB1)阴性对照空载(si-NNT-AS1+vector)组和ZEB 1过表达质粒(si-NNT-AS1+ZEB1)组.BALB/c雄性裸小鼠随机分为sh-NC组(n=5)和sh-NNT-AS1组(n=5),分别将转染sh-NC或sh-NNT-AS1慢病毒的A549细胞皮下注射到裸小鼠背部.35 d后切除肿瘤,测量肿瘤组织重量和体积.qRT-PCR检测NSCLC组织和细胞中NNT-AS1、miR-142-3p和ZEB1水平;双荧光素酶报告基因实验探究3个因子之间的作用关系.细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞增殖,集落形成实验测定集落形成数量,Tranwell测定迁移和侵袭细胞数量,肿瘤异种移植实验检测体内肿瘤生长情况.结果 与癌旁正常组织比较,NSCLC组织中 NNT-AS1 和ZEB1 mRNA上调[(3.28±0.26)vs.(1.05±0.04),(2.65±0.22)vs.(1.04±0.06)],miR-142-3p下调[(0.43±0.03)vs.(1.02±0.08)],差异均有统计学意义(P均<0.05).与人肺上皮细胞 BEAS-2B 比较,NSCLC 细胞系 H1650、A549、H1299、H2170 中 NNT-AS1 和 ZEB1 mRNA 上调,miR-142-3p 下调,差异均有统计学意义(P均<0.05);且A549细胞中NNT-AS1、miR-142-3p和ZEB1 mRNA表达差异变化最大,因此选择A549细胞继续进行后续的探究.与miR-NC组比较,A549细胞中miR-142-3p转染后降低了 NNT-AS 1-WT或ZEB 1-WT的荧光素酶活性,差异均有统计学意义(P均<0.05).与si-con组比较,si-NNT-AS1组A549细胞中NNT-AS1和ZEB1 mRNA、蛋白表达降低,miR-142-3p表达增高,差异均有统计学意义(P均<0.05);与si-NNT-AS 1+in-miR-con组比较,si-NNT-AS1+in-miR-142-3p组A549细胞中ZEB1 mRNA和蛋白表达升高,miR-142-3p表达降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);与si-NNT-AS1+vector组比较,si-NNT-AS1+ZEB1组A549细胞中ZEB1 mRNA和蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P均<0.05).与si-con组比较,si-NNT-AS 1组A549细胞活力[(0.42±0.04)vs.(0.84± 0.07)]、集落形成数量[(54.23±5.64)个vs.(117.36±11.24)个]、迁移和侵袭细胞数量[(72.16±6.54)个vs.(164.23± 12.34)个和(65.23±5.27)个vs.(123.18±10.21)个]均下调,细胞凋亡率[(21.69±2.54)%vs.(7.54±0.72)%]上调,差异均有统计学意义(P 均<0.05);与 si-NNT-AS 1+in-miR-con 组比较,si-NNT-AS1+in-miR-142-3p 组 A549 细胞活力、集落形成数量、迁移和侵袭细胞数量均上调,细胞凋亡率下调,差异均有统计学意义(P均<0.05);与si-NNT-AS1+vector组比较,si-NNT-AS 1+ZEB1组A549细胞活力、集落形成数量、迁移和侵袭细胞数量均上调,细胞凋亡率下调,差异均有统计学意义(P均<0.05).体内实验表明,与sh-NC组比较,sh-NNT-AS 1组肿瘤组织中NNT-AS 1和ZEB1 mRNA表达降低,miR-142-3p表达增高,肿瘤体积、重量以及增殖细胞核抗原(Ki67)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 沉默NNT-AS1抑制NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,可能与miR-142-3p/ZEB1轴有关.
长链非编码RNA烟酰胺核苷酸转氢酶反义RNA1、miR-142-3p、肺癌细胞、细胞行为
23
R734.2(肿瘤学)
陕西省教育厅科学研究计划项目;空军军医大学人才基金
2023-08-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共9页
760-767,封2