Fas通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活调控肝癌细胞增殖

摘要：

目的 探究肿瘤坏死因子受体超族成员6(Fas)调控肝癌细胞株增殖的潜在分子机制.方法 收集正常肝细胞 LO2 和肝癌细胞株 Hep3B、Huh7、PLC/PRF/5、Bel-7402、SMMC-7721、HepG2 和 SK-hep1,实时荧光定量 PCR 法检测Fas基因表达,运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析Fas基因表达与肝癌的关系,设计特异性靶向Fas的siRNA,敲低肝癌细胞中Fas基因的表达,通过噻唑蓝(MTT)实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,双荧光素酶实验检测β-连环蛋白(β-catenin)介导的T细胞因子(TCF)/淋巴增强子(LEF)转录活性,蛋白质印迹法检测β-catenin蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测无翅型MMTV整合位点家族成员(Wnt)/β-catenin信号通路下游靶基因八聚体结合转录因子3/4(Oct3/4);G1/S-特异性周期蛋白-D1(CCND1);血管内皮生长因子(VEGF);B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1(Bmi)的表达.结果 TCGA肝癌样品中Fas基因表达谱结果显示,肝癌组织Fas mRNA水平显著低于正常肝组织,差异有统计学意义(P＜0.001);同时随着肝癌病程的进展Fas基因的表达逐渐下调,且Fas高表达患者的生存率显著高于低表达患者,差异有统计学意义(P＜0.05);肝癌细胞Hep3B、Huh7、PLC/PRF/5、Bel-7402、SMMC-7721中Fas基因表达显著低于正常肝细胞LO2,差异均有统计学意义(t=19.20、19.16、19.20、12.81、7.58,P均＜0.05).与siRNA阴性对照(si-NC)组比较,肝癌细胞HepG2和SMMC-7721转染si-Fas后(si-Fas组)Fas 基因表达显著下调,差异均有统计学意义(t=25.20、42.63,P均＜0.05);克隆形成明显增多,差异均有统计学意义(t=3.97、3.76,P均＜0.05);凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(t=4.76、16.54,P均＜0.05);G2/M细胞周期占比更低,差异均有统计学意义(t=11.31、4.09,P均＜0.05).机制研究发现,与si-NC组比较,HepG2和SMMC-7721细胞si-Fas组中Wnt/β-catenin信号通路核心蛋白β-catenin蛋白表达上调,差异均有统计学意义(t=8.67、11.38,P均＜0.05);TOPflash相对荧光强度显著增加,差异均有统计学意义(t=5.54、5.06,P均＜0.05);Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因Oct3/4、CCND1、VEGF和Bmi表达上调,差异均有统计学意义(t=5.27、5.27、3.59、4.92,6.70、7.73、6.74、7.87,P均＜0.05).结论 Fas 可通过抑制肝癌细胞 Wnt/β-catenin信号通路的激活发挥抑制肝癌增殖的作用.

关键词：Fas、Wnt/β-catenin信号通路、肝癌

所属期刊栏目：23

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金;深圳市科技计划项目

在线出版日期：2023-08-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：733-738,759