重组降钙素原的原核表达及在质控品中的应用研究

摘要：

目的 构建重组降钙素原(PCT)原核表达系统,探索超声裂解对重组PCT蛋白稳定性的影响,为PCT质控品的开发与应用提供参考.方法 通过基因工程方法构建PCT表达质粒,利用大肠杆菌原核表达系统经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组PCT蛋白,分析其在三种不同免疫检测系统(罗氏cobas、梅里埃Vidas及天宝颂原FIA-T-01)中的免疫反应性,比较不同超声裂解功率对重组PCT蛋白稳定性及提取产率的影响,以荧光免疫检测系统评估质控品瓶间均一性及在2～8℃、37℃条件下的保存稳定性.结果 成功构建了 PCT-pET32a原核表达载体,重组PCT蛋白经IPTG诱导高效表达,分子量约35×103 Mr;超声时长20 min(超声3 s、间断2 s和功率120 W)裂解时,对重组PCT蛋白的稳定性影响最小,产量较高.以此工艺制备的质控品在三种主流PCT免疫检测系统中均表现出良好的免疫反应性,瓶间均匀性差异无统计学意义(F＜2.39).质控品在2～8℃贮存15个月、37℃贮存7d性能稳定.结论 超声裂解工艺会影响重组PCT蛋白的稳定性,制备的重组PCT蛋白可广泛用于不同检测系统质控检测,为临床检测质控提供稳定廉价的原料来源.

关键词：降钙素原、质控品、裂解工艺、均一性、稳定性

所属期刊栏目：22

分类号：R446.1(诊断学)

资助基金：广州市民生科技重大攻关项目;全军装备科研项目

在线出版日期：2022-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1191-1195