miR-152通过HLA-G/KIR2DL4通路对dNK分泌LIF和GM-CSF的影响

摘要：

目的 研究微小RNA-152(miR-152)通过其靶基因人类白细胞抗原G(HLA-G)与蜕膜NK细胞(dNK)表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)KIR2DL4之间通路,对dNK分泌白血病抑制因子(LIF)及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的影响.方法 收集2020年9月-2020年10月在西安市人民医院行人工流产患者的正常早孕蜕膜组织5例,分选、纯化dNK.在体外培养的HTR8细胞中过表达和抑制miR-152,分为对照组(未转染)、过表达组(转染miR-152 mimics)与抑制组(转染miR-152 inhibitor).实时定量PCR(qRT-PCR)检测转染后miR-152水平.构建dNK与过表达或抑制miR-152后的HTR8共培养体系,并在共培养过程中特异性封闭dNK KIR2DL4,分组为:NC组[HTR-8+dNK+白细胞介素-15(IL-15)共培养]、A组(过表达miR-152 的 HTR-8+dNK+IL-15)、B组(抑制 miR-152 的 HTR-8+dNK+IL-15)、C 组[过表达 miR-152 的 HTR-8+dNK+KIR2DL4 抑制物(anti-KIR2DL4)+IL-15]、D 组[过表达 miR-152 的 HTR-8+dNK+IgG1(anti-KIR2DL4对照物)+IL-15]、E组(转染 miR-152 mimics NC 的 HTR-8+dNK+anti-KIR2DL4+IL-15).酶联免疫吸附测定(ELISA)检测共培养24 h后上清中LIF、GM-CSF的表达.结果 转染后6h于荧光显微镜下观察转染效率(羧基荧光素酶标记对照),可见转染效率超过90％.与对照组(1.27±0.29)相比,过表达组细胞中miR-152表达水平升高(2.63±0.44),抑制组细胞中miR-152表达降低(0.34±0.12),差异均有统计学意义(F=130.47、130.47,P＜0.05).与NC组相比,C组共培养上清中LIF、GM-CSF的浓度最低;A、D、E组在过表达miR-152的前提条件下,共培养上清中LIF、GM-CSF的浓度均分别低于NC组;B组共培养上清中LIF、GM-CSF的浓度高于NC组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-152能够通过HLA-G/KIR2DL4通路影响dNK分泌LIF、GM-CSF.

关键词：微小RNA、蜕膜NK细胞、白血病抑制因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子

所属期刊栏目：22

分类号：R714(妇产科学)

资助基金：国家自然科学基金;陕西省自然科学基础研究计划项目;西安市科技计划项目

在线出版日期：2022-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：625-629