10.3969/j.issn.1672-3619.2022.03.005
微小RNA-146a通过抑制巨噬细胞自噬促进ox-LDL诱导的泡沫细胞形成
目的 研究小分子RNA-146a(miR-146a)对泡沫细胞形成的作用和与巨噬细胞自噬之间的关系.方法 在体外培养人急性单核细胞白血病细胞(THP-1细胞系),采用佛波酯(PMA)诱导分化为巨噬细胞.在巨噬细胞中采用氧化修饰的低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激,分为对照组(Vehicle组)、ox-LDL组(80 μg/mL ox-LDL)、Inhibitor组[80μg/mL ox-LDL+miR-146a抑制剂(inhibitor)],48 h后采用 Real time PCR 检测 miR-146a mRNA,油红O染色检测细胞内脂质,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色检测自噬小体,ELISA检测白细胞介素-1p(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,Real time PCR和Western blot检测自噬效应蛋白Beclin1、自噬相关蛋白5(ATG5)和微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)表达.结果 ox-LDL呈浓度依赖地促进巨噬细胞中miR-146a的表达;与Vehicle组比较,ox-LDL组巨噬细胞内的脂质堆积加重[(0.45±0.07)vs.(0.23±0.05)],促炎因子IL-1β[(55.3±5.2)pg/mL vs.(33.6±3.8)pg/mL]、TNF-α[(57.5±5.3)pg/mL vs.(35.3±3.7)pg/mL]水平增加,TGF-β1[(51.7±2.9)pg/mL vs.(60.3±5.4)pg/mL]、LC3-Ⅱ mRNA[(0.83±0.03)vs.(1.00±0.02)]表达水平下调,巨噬细胞自噬水平抑制,差异均有统计学意义(P<0.05);在抑制巨噬细胞中miR-146a的表达后,与ox-LDL组比较,Inhibitor组巨噬细胞内的脂质堆积减轻[(0.29±0.05)vs.(0.45±0.07)],IL-1β[(41.8±4.7)pg/mL vs.(55.3±5.2)pg/mL]、TNF-α[(37.2±3.1)pg/mL vs.(57.5±5.3)pg/mL]水平降低,TGF-β1[(57.8±3.5)pg/mL vs.(51.7±2.9)pg/mL]、LC3-Ⅱ mRNA[(1.08±0.04)vs.(0.83±0.03)]表达水平上调,巨噬细胞自噬水平增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 在泡沫细胞形成的过程中miR-146a的表达水平增加,miR-146a通过抑制巨噬细胞的自噬促进ox-LDL诱导的泡沫细胞形成.
巨噬细胞、miR-146a、自噬、脂质
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R544.1(心脏、血管(循环系)疾病)
广东省医学科研基金;广东省医学科研基金
2022-05-09(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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317-321,封4