靶向人巨细胞病毒UL145基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建

摘要：

目的 构建靶向人巨细胞病毒UL145基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒.方法 根据CRISPR/Cas9设计原则,设计3条靶向UL145基因的gRNA,构建重组lenti CRISPR-UL145-T1、T2、T3表达质粒,转化并挑选阳性克隆,进行PCR及测序验证.同时通过荧光素酶SSA(Luciferase SSA)检测CRISPR/Cas9活性,筛选出载体活性最佳质粒.结果 设计了3条靶向gRNA并构建lenti CRISPR-UL145-T1、T2、T3表达质粒,经PCR及测序鉴定载体构建成功;通过Luciferase SSA 检测,结果显示,lenti CRISPR-UL145-T3载体活性最强,明显高于lenti CRISPR-UL145-T1、T2载体活性.结论 重组质粒lenti CRISPR-UL145-T3筛选为活性最佳质粒,为进一步进行体内外敲除人巨细胞病毒UL145基因及其功能奠定基础.

关键词：人巨细胞病毒、UL145、CRISPR/Cas9、基因敲除

所属期刊栏目：21

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：广东省自然科学基金2016A030313788

在线出版日期：2021-03-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：10-12,17,封3