登革2型病毒NS2BH-NS3蛋白酶复合物的原核表达及活性研究

摘要：

目的 通过原核表达获得登革2型病毒NS2BH-NS3pro重组蛋白,并对其蛋白酶活性进行初步研究.方法 通过引入G4TG4连接臂,利用重叠PCR扩增登革2型病毒NS2BH和NS3pro基因序列,构建pET-28b-NS2BH-G4TG4-NS3pro蛋白酶复合物原核表达载体,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对纯化后重组蛋白进行鉴定,FRET技术检测其蛋白酶活性.结果 成功构建pET-28b-NS2BH-G4TG4-NS3pro原核表达载体,获得与预期分子量大小相符且纯度较高的可溶性蛋白,质谱分析表明重组蛋白为登革2型病毒NS2BH-NS3pro蛋白酶复合物,具有较高的蛋白酶活性.结论 基因工程技术获得的NS2BH-G4TG4-NS3pro重组蛋白为后续登革病毒蛋白酶适配体抑制剂的筛选奠定了基础.

关键词：登革2型病毒、NS2BH-NS3pro、原核表达、蛋白酶活性

所属期刊栏目：16

分类号：R373.3+3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：广东省科技计划项目2013B0218003,2014A020212351;广州市属高校重点学科建设经费资助项目穗教高教[2011]34号

在线出版日期：2016-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：991-994