乙型肝炎病毒X蛋白诱导p16INK4A基因启动子甲基化及其机制研究

摘要：

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对p16INK4A基因启动子甲基化的影响及机制.方法 以HepG2细胞和稳定表达GFP/HBx融合蛋白的HepG2/GFP-HBx为实验细胞,HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx细胞接种于裸鼠皮下建立裸鼠肝癌皮下移植瘤;设计合成靶向HBV X的siRNA(X-siRNA)和对照siRNA,用X-siRNA、5-N-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)单独或联合处理细胞及裸鼠;甲基化PCR检测细胞及移植瘤组织p16INK4A基因甲基化;RT-PCR法测定DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的mRNA表达.结果 甲基化PCR检测显示HepG2/GFP-HBx组细胞及移植瘤组织均存在p16INK4a甲基化而HepG2/GFP组均未检出p16甲基化;X-siRNA、5-Aza-CdR处理的细胞及移植瘤组织中p16INK4A基因甲基化均减低;RT-PCR检测显示GFP-HBx/HepG2组DNMT1、DNMT3A较HepG2组显著升高,差异有统计学意义(P=0.000 2、P=0.000 5),较GFP/HepG2细胞组也显著升高,差异有统计学意义(P=0.001 1、P=0.0005),而DNMT3B在HepG2、GFP/HepG2、GFP-HBx/HepG2细胞组组间检测值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HBX蛋白可能通过上调DNMT1、DNMT3A mRNA的转录表达而诱导p16INK4A基因启动子的甲基化.

关键词：乙型肝炎病毒X蛋白、p16、甲基化、DNA甲基化转移酶

所属期刊栏目：16

分类号：R373.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金81071409

在线出版日期：2016-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：976-979