弓形虫ROP18蛋白激酶在酵母中的表达纯化及激酶活性鉴定

摘要：

目的 建立利用酵母表达系统获得有较高激酶活性的弓形虫棒状体蛋白(ROP18)激酶的表达纯化方法.方法 利用PCR技术从弓形虫基因组DNA扩增弓形虫ROP18基因,通过Gateway系统将ROP18基因克隆到酵母表达载体pEGH-A中.将表达载体pEGH-A-ROP18转化至Y258酵母菌株中并诱导表达,表达产物纯化后通过SDS-PAGE进行纯度鉴定;最后通过激酶活性实验对纯化的重组蛋白进行激酶活性鉴定.结果 构建了弓形虫ROP18激酶重组表达质粒pEGH-A-ROP18和pEGH-A-ROP18-KD,并成功在酵母表达系统表达弓形虫ROP18重组蛋白,其分子量约为8.2×104 Mr,SDS-PAGE蛋白电泳显示为单一条带,并具有较高的激酶活性.结论 利用酵母细胞表达系统成功表达并纯化了有激酶活性的弓形虫ROP18蛋白激酶.

关键词：弓形虫、ROP18、酵母表达、纯化、激酶活性

所属期刊栏目：16

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金81328014;广东省自然科学基金2015A030313105;广东省科技计划项目2014A020214002

在线出版日期：2016-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：687-690