非侵袭性产前胎儿RHD基因型检定平台的建立

摘要：

目的 探讨Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因作为通用胎儿DNA标记的可行性,建立Real-time PCR为基础的非侵袭性产前胎儿RHD基因型定型平台.方法 抽取未孕自愿者7名(男2名,女5名)和43例RhD阴性孕妇的EDTA抗凝血5 ml,分离血浆抽提其中的游离细胞DNA.联合使用5种甲基化敏感性限制性内切酶对未/低甲基化的母源性RASSF1A基因进行酶切以保留高度甲基化的胎源性RASSF1A基因;同时酶切未甲基化的β-actin基因作为对照,以检测酶切的彻底性;通过Real-time PCR扩增酶切前的RASSF1A基因和β-actin基因、酶切后的RASSF1A基因,分别检测血浆总游离细胞DNA和胎儿游离细胞DNA;对确认存在胎儿DNA的标本,扩增RHD基因的外显子5和7,以检定胎儿的RHD基因型.结果 7例未孕自愿者和43例孕妇酶切处理前的RASSF1A基因和β-actin基因扩增均阳性.酶切处理后,7例未孕自愿者和2例孕妇未检测到RASSF1A基因和β-actin基因,41例孕妇检测到RASSF1A基因、未检出β-actin基因,其中39例检出RHD基因外显子5和7.结论 RASSF1A基因可作为通用的胎儿DNA标记,荧光定量PCR扩增RHD基因外显子5和7的平台可用于非侵袭性胎儿RHD基因型别检定.

关键词：非侵袭性、RASSF1A基因、Rhesus D、基因型、real-time PCR

所属期刊栏目：15

分类号：R714.55(妇产科学)

资助基金：广东省医学科研基金A2012531

在线出版日期：2015-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：42-45,72