恶性疟原虫信号肽肽酶原核表达载体的构建及融合表达蛋白的鉴定
目的 构建恶性疟原虫PfSPP基因pMAL-p2x的原核表达载体,并鉴定表达,为其功能研究奠定基础.方法 体外培养恶性疟原虫(3D7株和FCR3株),提取虫体总RNA,进行反转录后,采用RT-PCR扩增HSPP的全编码区基因,将其克隆入原核表达载体pMAL-p2x,PCR、双酶切鉴定重组质粒,并进行序列测定,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌进行表达获得MBP-PfSPP融合蛋白,采用Western blotting对表达产物进行鉴定.结果 成功构建pMAL-PfSPP,转化菌经诱导表达出分子量约为77 000Mr的MBP-PfSPP融合蛋白,抗MBP多克隆抗体可特异性地识别表达的融合蛋白.结论 成功表达具有多个跨膜结构的膜蛋白PfSPP,从而为深入研究PfSPP的酶活性及生物学功能奠定基础.
恶性疟原虫、信号肽肽酶、膜蛋白、原核表达
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R382.31(医学寄生虫学)
广东省自然科学基金S2012010008504;高等学校学科创新引智计划B12003;中山大学人才项目50000-3182305
2014-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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