华支睾吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶的表达定位及其酶活性的研究

摘要：

目的 克隆和表达有酶活性的华支睾吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(CsTPx),并进行组织定位研究,为进一步研究其功能奠定基础.方法 利用生物信息学方法从华支睾吸虫基因组文库中识别硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)基因,并对蛋白的结构特征和相关生物学和免疫学功能进行预测.从华支睾吸虫成虫cDNA中扩增目的基因,克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,进行蛋白纯化,免疫印迹鉴定、组织定位及其酶活性的检测.结果 华支睾吸虫TPx基因全长2 175 bp,有一大一小的两个内含子,其编码区序列长度为636 bp,编码212个氨基酸;该蛋白第1～17位氨基酸为其信号肽序列,第51～74位氨基酸为跨膜区,属于经典的2-Cys过氧化物还原酶.重组蛋白可被感染了华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该蛋白定位于成虫的皮层、肠支、卵黄腺、虫卵和囊蚴的体壁中.酶活性检测结果表明,在一定范围内,CsTPx还原H2O2呈剂量和时间依赖性.抗体对酶活性有影响,在合适的抗体水平可以促进酶活性.结论 CsTPx可在大肠杆菌中进行功能性表达,其产物具有良好的免疫学和生物学活性.

关键词：华支睾吸虫、硫氧还蛋白过氧化物酶、组织定位、酶活性

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分类号：R383.22(医学寄生虫学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2010CB530000;广东省科技计划项目2012B031800140

在线出版日期：2014-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：975-979,983,封2