抗ANXA2单克隆抗体的制备及初步鉴定

摘要：

目的 制备ANXA2特异性单克隆抗体(McAb),为研究ANXA2的生物学功能和检测该蛋白提供有力的抗体工具.方法 用经IPTG诱导表达的基因重组PGEX-4T-1-ANXA2抗原免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法筛选抗ANXA2杂交瘤细胞,用ELISA法鉴定所得单抗腹水的效价及Western blot鉴定McAb特异性.单抗纯化和Eu3+标记后,分别包被聚苯乙烯板及作为铕标单抗,利用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)筛选出检测ANXA2蛋白的最佳配伍单抗.结果 经细胞融合、筛选、克隆化,获得了16株可分泌高效价单抗的杂交瘤细胞,间接ELISA显示16株McAb与空载体PGEX-4T-1均未发生交叉反应,抗体特异性良好,16株抗体腹水效价为1∶8000～1∶256 000,培养上清效价为1∶256～1∶512,纯化的腹水单抗经配对试验,2D6和9H9-Eu3+配对最佳.结论 获得16株能稳定分泌高特异性抗ANXA2的杂交瘤细胞,能用于后续研究.

关键词：ANXA2、单克隆抗体、ELISA

所属期刊栏目：14

分类号：R735.7(肿瘤学)

在线出版日期：2014-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：578-581,618