用FRET技术研究TRPC1和Akt在细胞迁移中的相互作用
目的 利用荧光共振能量转移(FRET)技术研究在细胞迁移过程中瞬时受体电位阳离子通道1(TRPC1)和蛋白激酶B (PKB/Akt)的相互作用.方法 构建质粒pECFP-C1-TRPC1和pEYFP-C1-Akt,并转染非洲绿猴肾细胞(cos-7 cell),用激光共聚焦显微镜观察表皮生长因子(EGF)激活cos-7细胞前后的荧光蛋白表达和分布情况,并利用FRET检测EGF刺激cos-7细胞前后的TRPC1和Akt分子间的能量转移效率(E)和相互作用距离(R).结果 在EGF激活的cos-7细胞中,TRPC1和Akt蛋白有共定位现象;分别表达融合荧光蛋白后用EGF激活cos-7细胞,可见TRPC1由胞质转位到胞膜及近膜区,Akt未发生变化;共表达融合荧光蛋白后用EGF激活cos-7细胞,TRPC1和Akt由胞质转位到胞膜及近膜区,并共定位在细胞移动方向的前极;FRET检测结果显示其能量转移效率为40％,两个分子间的作用距离为5nm.结论 在EGF激活cos-7细胞迁移过程中,TRPC1和Akt发生了FRET,表明TRPC1和Akt之间有相互作用.
荧光共振能量转移、瞬时受体电位阳离子通道1、Akt、细胞迁移
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Q25(细胞生理学)
国家自然科学基金30971193,81071611,30800438
2013-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
1189-1192,封3
