建立环介导等温扩增方法检测腹泻患者中小肠结肠炎耶尔森菌

摘要：

目的 建立快速的检测方法对腹泻患者中的小肠结肠炎耶尔森菌进行快速检测.方法 利用析因设计试验方法建立并优化检测小肠结肠炎耶尔森菌的环介导等温扩增技术(LAMP),并与普通PCR法对临床腹泻标本进行检测比较.结果 析因设计试验确定LAMP最佳反应体系:Mg2++为2.0 mmol,内引物FIP/BIP为1.6 μmol,dNTPs为1.6 mmol,时间为60 min,反应温度为63℃.对12种细菌进行LAMP扩增,仅小肠结肠炎耶尔森菌获得阳性扩增结果,小肠结肠炎耶尔森菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别为38.05 fg和15 CFU/ml.对腹泻样本进行直接检测,检测限为150 CFU/g.539例腹泻患者粪便标本中,LAMP成功检出13例样本中含有小肠结肠炎耶尔森菌,普通PCR检出11例,灵敏度为100％,特异度为99.62％.结论 本方法检测小肠结肠炎耶尔森菌特异性强、灵敏度高,且操作简单、快速、检测成本低,适合基层单位及现场应用.

关键词：小肠结肠炎耶尔森菌、析因设计、环介导等温扩增技术(LAMP)、腹泻

所属期刊栏目：13

分类号：R574.62(消化系及腹部疾病)

在线出版日期：2013-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：449-452,495