稳定过表达、干扰RN181的MHCC97L细胞系建立及RN181功能的初步研究

摘要：

目的 构建过表达和干扰RN181基因的肝癌MHCC97L重组细胞系,并研究RN181对该细胞体外增殖的影响.方法 基于基因克隆技术,构建plncx2-GFP-IRES/RN181重组载体,常规鉴定后,与pVSV-G共转染GP2-293细胞包装逆转录病毒.该病毒与RN181干扰慢病毒分别感染MHCC97L细胞,流式分选表达绿色荧光的细胞,RT-PCR、Western blotting鉴定后,CCK-8实验和软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖情况.结果 重组载体构建成功,重组细胞荧光良好,RT-PCR、Western blotting分别证实重组细胞中RN181的mRNA和蛋白表达水平在重组细胞系间均出现差异有统计学意义(P＜0.05).增殖实验显示RN181上调后细胞生长减慢,克隆数也显著少于对照组(P＜0.05),而RN181干扰后上述现象可得到逆转.结论 成功构建了过表达和干扰RN181的MHCC97L重组细胞系,初步证实了RN181在体外对MHCC97L细胞增殖的抑制作用.

关键词：RN181、基因克隆、病毒包装、稳定表达

所属期刊栏目：13

分类号：R394.2;R735.7

资助基金：国家自然科学基金81171959

在线出版日期：2013-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：393-396,封4