深圳市手足口病重症感染性克隆的构建和分析

摘要：

目的 构建肠道病毒71型(EV71)的感染性克隆,为EV71致病机理的研究和药物的开发建立技术平台.方法 选取临床手足口重症儿童粪便样品,经荧光定量PCR检测为阳性,RT-PCR方法扩增出EV71全基因组,通过TA克隆的方法连接到TOPO-XL-PCR载体中,应用T7聚合酶系统将线性化的EV71 DNA序列体外转录成RNA,转染人横纹肌肉瘤细胞系RD-A细胞,病毒传代并观察病变,通过间接免疫荧光实验进一步鉴定,获得的感染性克隆进行全基因组测序和序列比对分析.结果 RT-PCR可以获得EV71全长约7.5 kb的DNA片段,体外转录并转染后3～5 d可观察到典型的肠道病毒致细胞病变,免疫荧光可看到特异标记,序列比对为C4a亚型的EV71病毒.结论 构建出具有感染性的EV71全长cDNA克隆,在分子生物学水平上有利于深入研究EV71的致病机制和毒力基因、患者抗体的中和特性、疫苗和药物的效力评估与开发等.

关键词：手足口病重症、感染性克隆、序列比对

所属期刊栏目：12

分类号：R512.5(传染病)

资助基金：广东省医学科技基金B2011288

在线出版日期：2012-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：827-829,845