真菌通用引物结合高分辨熔解曲线分析检测鉴定常见曲霉菌

摘要：

目的 探索一种能够快速检测鉴定临床常见侵袭性曲霉菌病原的新型分子生物学方法.方法 以真菌核糖体RNA基因的内转录间隔区2为靶基因,在5.8S、28S rRNA基因上设计泛真菌通用引物,扩增临床常见曲霉菌.同时用新生隐球菌基因组DNA、人基因组DNA及临床常见细菌基因组DNA进行引物特异性检测.将通用真菌引物扩增产物进行高分辨熔解曲线分析.以新鲜提取的烟曲霉基因组DNA为模板按照1:10的比例梯度稀释,进行敏感性检测.检测7个浓度梯度的烟曲霉基因组DNA.结果 设计的真菌通用引物可以扩增临床常见的4种曲霉菌及新生隐球菌,但与人基因组DNA和临床常见细菌基因组DNA无扩增反应,检测限可低至1.5 pg/μl,且4种曲霉菌及新生隐球菌扩增产物的熔解曲线不同.该方法敏感性和特异性均较好.结论 利用真菌通用引物的扩增产物结合高分辨熔解曲线分析可以达到检测鉴定临床常见4种曲霉菌的目的,此方法对侵袭性曲霉菌的快速检测鉴定具有重要意义.

关键词：曲霉菌、真菌通用引物、序列差异、高分辨熔解曲线分析

所属期刊栏目：12

分类号：R379.6(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：广东省教育部产学研结合项目2009B090300281

在线出版日期：2012-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：589-592