点带石斑鱼抗菌肽hepcidin基因克隆及其成熟肽的原核融合表达

摘要：

目的 克隆点带石斑鱼hepcidin前体cDNA序列,构建其成熟肽pET-32a融合表达载体.方法 根据已报道的硬骨鱼类hepcidin eDNA序列设计简并引物,以点带石斑鱼(Epinephelelus malabaricus)肝脏为材料,通过RT-PCR扩增hepcidin cDNA序列.用比对推导的氨基酸序列预测其成熟肽段.再将成熟肽cDNA序列亚克隆至pET-32a构建原核表达并进行原核融合表达.结果 获得点带石斑鱼hepeidin-like抗菌肽前体cDNA序列1条,GenBank登录号为HM474788.DNA序列的Blast分析以及推导氨基酸序列NJ进化树分析表明,HM474788是点带石斑鱼第1条报道的抗菌肽hepcidin cDNA序列.成功构建了该序列的成熟肽原核融合表达载体pET-32a-hepcidin(EMl),并成功在大肠杆菌origami(DE3)中表达.结论 成功克隆点带石斑鱼hepcidin-1ike抗菌肽前体eDNA序列,成熟肽成功在大肠杆菌中融合表达,为后续有关石斑鱼hepcidin的功能研究与实践应用奠定重要基础.

关键词：点带石斑鱼、抗菌肽、hepcidin、分子克隆、原核融合表达

所属期刊栏目：11

分类号：R392.11

资助基金：国家863项目2006AA100308;深圳市科技计划项目200326;深圳大学科技创新团队项目200904

在线出版日期：2011-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：117-121