细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95的构建及其在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达

摘要：

目的 构建细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,并研究该质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达.方法 超声粉碎细粒棘球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增Eg95抗原编码基因;克隆至原核表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-Eg95;转化大肠杆菌B121,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析和鉴定.结果 RT-PCR扩增出471 bp的Eg95抗原编码基因;双酶切证实Eg95抗原编码基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析显示表达产物为相对分子质量约42 500的重组蛋白,与预期结果 一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的21%;Western blot鉴定显示重组蛋白能被细粒棘球蚴感染鼠血清识别.结论 成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,该质粒在大肠杆菌B1221中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性.

关键词：细粒棘球绦虫、重组质粒pGEX-Eg95、大肠杆菌

所属期刊栏目：9

分类号：R383.33(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30801052;30671835;30500423;30200239

在线出版日期：2009-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：227-230,234