嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

摘要：

目的 扩增编码Ⅳ型菌毛蛋白的嗜肺军团菌pilE基因,构建重组质粒pET32a(+)-pilE并在原核系统中表达,纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE,为进一步探讨Ⅳ型菌毛蛋白的作用及其作为军团病的诊断抗原提供实验基础.方法 采用聚合酶链式反应(PCR)从嗜肺军团菌扩增得到pilE基因,构建重组质粒pET32a(+)-pilE,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用聚合酶链式反应、限制性酶切分析、序列分析鉴定后,IPTG诱导表达PILE蛋白,用硫酸十二烷酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western印迹鉴定.使朋HisTrapTM HP亲和层析柱纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE.结果 扩增出430bp的pilE基因;构建了重组质粒pET32a(+)-pilE;表达并纯化出35700Mr的目标蛋白.结论 成功构建了嗜肺军团菌pilE基因的原核重组质粒,并在原核系统中得到了高效表达.成功纯化Ⅳ型菌毛蛋门PILE.

关键词：嗜肺军团菌、Ⅳ型菌毛蛋白、表达、纯化

所属期刊栏目：9

分类号：R378.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：教育部高等学校博士学科点专项科研基金20060610091

在线出版日期：2009-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：135-139