NNMT真核表达载体的构建并转染SMMC7721肝癌细胞株
目的 构建pcDNA3.1(-)/NNMT(尼克酰胺-N-甲基化酶)真核表达载体并将其稳定转染到肝癌细胞系SMMC7721中.方法 采用PCR法从PGEX4T-1/NNMT重组质粒中克隆得到NNMT cDNA全长序列,并将扩增的cDNA片段与pMD19-T载体连接后亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)中.重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将其导入到人肝癌细胞系SMMC7721,经G418筛选并建立稳定的转染细胞株,应用RT-PCR检测转染前后该细胞株NNMT基因的mRNA表达水平.结果 真核表达载体构建成功,经RT-PCR检测,重组质粒转染株的NNMT基因mRNA表达水平高于对照组,证实NNMT基因已经稳定转染到SMMC7721细胞中并得到表达.结论 成功建立了人基因NNMT的稳定转染细胞株,为进一步研究NNMT的功能奠定了基础.
NNMT、载体构建、转染
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R735.7(肿瘤学)
国家高技术研究发展计划863计划2006AA02A311
2009-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共4页
132-134,157
