应用伴侣分子在大肠杆菌表达系统高效表达家蝇天蚕素
目的 应用伴侣分子在大肠杆菌表达系统中高效表达家蝇天蚕素,研究伴侣分子对家蝇天蚕素基因在大肠杆菌中表达的影响.方法 RT-PCR克隆家蝇的天蚕素成熟肽(mature cecropin,MC)与泛素(ubiquitin,UBI)基因,利用牛物信息学方法分析硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)-MC和MC分子结构及Trx-MC分子和Trx-UBI-MC两种融合蛋白mRNA 5'端的二级结构的异同.分别构建pET32a-MC和pET32a-UBI-MC两种重组质粒,转化入大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中.检测Trx-MC融合蛋白的表达和pET32a-MC和pET32a-UBI-MC在相同诱导时间及诱导剂浓度的条件下,融合蛋白表达量的差异.结果 生物信息学分析结果显示MC分子被Trx分子包裹在其内部,MC分子的细胞毒性被去除,使其可以在大肠杆菌中正常表达.分子生物学实验结果进一步验证了生物信息学分析结果的正确性.同时,也显示UBI分子的加入,未影响融合蛋白质Trx-UBI-MC与Trx-MC的mRNA5'端二级结构.并且Trx-UBI-MC融合蛋白在全菌蛋白中的含量明显高于Trx-MC.结论 Trx作为伴侣分子包裹了MC的天然结构.使其对宿主菌无毒性.UBI作为伴侣分子,在相同转录水平、翻译水平条件下,明显提高了蛋白的表达量.
家蝇、天蚕素、伴侣分子、融合表达、生物信息学
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R378.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金30471504;广东省科技攻关项目2005B33701004
2009-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
128-131,139
