重组人血红蛋白δ链的制备与鉴定

摘要：

目的 克隆人血红蛋白δ(delta)链蛋白基因,并在大肠杆菌中进行表达,经纯化与鉴定,获得δ链蛋白,为建立β-地中海贫血的免疫学筛查方法提供特异性抗原.方法 从K562细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术获得目的 片段并将其克隆到pET-32a及pET43.1a载体中,经PCR、酶切及测序验证,以IPTG诱导其在大肠杆菌中表达.包涵体经变性、复性后以Ni2+亲和层析柱纯化,可溶性蛋白直接以Ni2+亲和层析柱纯化.采用Western Blot和ELISA分析鉴定表达产物.结果 成功构建两种融合表达载体pET32-Hbδ及pET43.1.Hbδ,分别为包涵体表达和可溶性表达,纯化产物经Western blotting和ELISA鉴定均为δ链蛋白.结论 克隆表达并获得了纯化的人血红蛋白δ链,为后续的抗体制备及地中海贫血的免疫筛选方法的建立提供了抗原.

关键词：血红蛋白δ链、HbA2、基因克隆、融合蛋白

所属期刊栏目：9

分类号：R392

资助基金：广州市科技计划06A1212008

在线出版日期：2009-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：22-24,31