慢病毒介导的外源基因体外投递系统的建立

摘要：

目的 针对不同哺乳类细胞建立相应的慢病毒体外感染体系,以建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统.方法 按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带EGFP基因)包装(脂质体介导的瞬时转染)、超速离心浓缩和保存等,随后用病毒上清或浓缩后的病毒感染293FT细胞.24～48 h后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功生产:将携带EGFP基因的病毒上清或浓缩后的病毒分别加入内含293FT细胞、小鼠ES细胞、小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)或小鼠睾丸生殖细胞的培养板孔内,感染6～12 h后.用相应培养基替换感染液,数天后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功感染不同哺乳类细胞.结果 按标准程序生产的携带EGFP基因慢病毒(病毒上清或浓缩后的病毒)成功高效率感染293FT细胞、MEFs或小鼠睾丸生殖细胞;用浓缩后的病毒(携带EGFP基因)感染小鼠ES细胞.亦可获得EGFP阳性的ES细胞克隆.结论 熟练掌握了慢病毒包装、浓缩及鉴定等技术.同时针对不同哺乳类细胞建立了相应的慢病毒介导的外源基因体外传递系统,这些为相关后续研究打下了良好的基础.

关键词：慢病毒、293FT细胞、小鼠胚胎干细胞、小鼠胚胎成纤维细胞、小鼠睾丸生殖细胞

所属期刊栏目：8

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金委员会-广东省联合基金重点项目u0732006;国家自然科学基金No.30271177:广东省自然科学基金021903;广东省卫生厅基金A2007359;南方医科大学优秀中青年科技人才库科研资助金;广州地区科学仪器协作共用网专用基金2006176

在线出版日期：2009-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1028-1029,1037,封4