阴道毛滴虫RRas基因的cDNA克隆和原核表达

摘要：

目的 克隆和表达阴道毛滴虫Rras(TvRRas)基因,以便进一步探讨其组织定位及功能.方法 应用PCR方法从构建的阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增TvRRas基因片段,克隆至pGEM-T载体,经PCR、酶切和测序鉴定后亚克隆至原核表达载体pET-41a,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍-硝基三乙酸(Ni-NTA)柱纯化表达产物后用SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析鉴定.结果 从阴道毛滴虫cDNA表达文库中扩增的TvRRas基因片段长522 bp,酶切及DNA测序证实pET-41a/TvRRas重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为45 000 u.结论 成功构建重组原核表达质粒pET-41a/TvRRas,并能在大肠埃希菌内表达,所表达的融合蛋白分子量大小与预期一致.

关键词：阴道毛滴虫、RRas基因、克隆、原核表达

所属期刊栏目：6

分类号：R382.21(医学寄生虫学)

在线出版日期：2007-01-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1257-1259