大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因的改造及在大肠杆菌中的表达

摘要：

目的通过将发生点突变的两个大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因进行改造,获得具有正确序列的OSCP基因,在大肠杆菌中表达并进行活性鉴定.方法通过限制性核酸内切酶和T4DNA连接酶将发生错义突变的两个OSCP基因的DNA克隆进行改造,获得具有正确核苷酸序列的OSCP基因;然后将该片段连接进原核表达载体pET-28c(+),构建成重组质粒PET-28c(+)-OSCP;用该重组质粒转化E.coli,转化子在37℃诱导表达相应的融合蛋白,通过Western-blot鉴定.结果酶切及测序显示对OSCP基因错义突变的纠正获得成功.酶切结果显示成功构建了原核表达载体pET-28c(+)-OSCP.IPTG诱导表达4 h后,SDS-PAGE及Western-blot显示诱导表达出分子量约23 000的大鼠寡霉素敏感相关蛋白,且该蛋白具有免疫活性.结论在国内初次表达出大鼠OSCP,表达产物具有免疫反应性,为OSCP的结构及功能研究奠定了基础.

关键词：寡霉素敏感相关蛋白、亚克隆、基因改造、膜受体、ATP合成酶/ATP酶

所属期刊栏目：6

分类号：R378.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2006-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：274-277