体外人巨细胞病毒感染细胞细胞周期素表达改变与细胞病变的关系

摘要：

目的探讨人巨细胞病毒( human cytomegalovirus, HCMV)感染的人胚肺成纤维上皮细胞( human embryo lung fibroblast, HEL)细胞周期素 E (cyclin E)、 D (cyclin D)、 A (cyclin A)、 B (cyclin B)表达的改变与细胞病变的关系.方法建立体外 HCMV感染细胞膜型,观察感染细胞感染 12、 48h后细胞病变( cytopathologic effects, CPE);并在相同时间点收获细胞,用乙醇固定 HCMV感染的宿主细胞后用 PI染色,经流式细胞术( FACSVantage)根据细胞 DNA倍性分选出 G1、 S、 G2/M期细胞,然后分别取等量细胞裂解, 用 Western blot分析上面各不同时相细胞中 cyclins的表达.结果 ①培养 12h,仅病毒感染组在电镜可观察到细胞肿胀,其余各组未见明显病变;②培养 48h,与 HCMV169感染组相比,药物干预 HCMV169感染 HEL两组细胞中,光镜及电镜 CPE程度较轻,正常组细胞无 CPE;③乙醇固定细胞经流式细胞术分选,感染 12、 48h细胞均以 G1为主,少见 S期细胞、未见 G2期和 M期的细胞,与正常对照组比较有显著差异( P< 0.05);根据细胞 DNA倍性分选出的各期细胞裂解行 Western blot检测,正常细胞未检测到 cyclins,感染细胞中 cyclin E、 cyclin D有明显表达,未见 cyclin A、 cyclin B的表达.④ Western blot对分选后的感染细胞中 cyclin E、 cyclin D表达的检测与流式细胞术分析的结果一致.结论体外 HCMV感染细胞细胞周期进程受阻与细胞病变关系密切,细胞周期进程异常可能是导致细胞病变的病理学基础.

关键词：人巨细胞病毒、细胞周期蛋白、人胚肺成纤维细胞、流式细胞仪、蛋白免疫印记法

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分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30271673;广东省科技厅科研项目2002B30506

在线出版日期：2004-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：377-381