铁皮石斛DoSMT2基因的克隆与表达分析

摘要：

为了解SMT2基因在铁皮石斛(Dendrobium officinale)甾醇代谢过程中的作用,利用RACE技术克隆到1个DoSMT2基因,开放阅读框为1089 bp,编码362个氨基酸,DoSMT2相对分子量为40.345 kD,理论等电点为8.13,属于稳定的亲水性蛋白.经BLAST P检索,DoSMT2蛋白属于AdoMet-MTases超级家族,含有4个S-腺苷蛋氨酸结合位点、1个甲基转移酶保守结构域和1个甾醇甲基转移酶C末端保守结构域.系统进化分析表明,DoSMT2与深圳拟兰(Apostasia shenzhenica)的SMT2亲缘关系最近,确定其属于SMT2家族.qRT-PCR分析结果表明,DoSMT2基因在茎和叶都能表达,10月份的表达量最高,叶片的表达量显著高于茎,推断叶片的甾醇代谢比茎活跃.构建了pET-29a-DoSMT2原核表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达出预期大小的蛋白.这为铁皮石斛DoSMT2的甲基化机制及甾醇化合物代谢研究奠定基础.

关键词：铁皮石斛、甾醇C-24甲基转移酶、原核表达、荧光定量PCR

所属期刊栏目：28

资助基金：福建省自然科学基金面上项目2018J01119

在线出版日期：2020-11-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：591-598