大叶石上莲ISSR-PCR反应体系的建立与优化

摘要：

为建立并优化大叶石上莲(Oreocharis benthamii)ISSR-PCR反应体系,采用改良的CTAB法提取大叶石上莲叶片DNA,利用正交试验设计方法,从Mg2+、dNTP、 引物、Taq DNA聚合酶以及模板DNA 5因素4水平,对大叶石上莲ISSR-PCR反应体系进行优化,确立了适用于大叶石上莲的扩增多态性高、 稳定性强、 条带清晰的ISSR最佳反应体系:2.0μL的10×PCR缓冲液,2.0 mmol/L Mg2+,0.25 mmol/L dNTP,0.7μmol/L引物,2.0 U Taq DNA聚合酶,30 ng DNA模板(20μL反应体系).在此基础上,从100条引物中筛选出13条ISSR扩增引物,其中5条引物最为合适并已确定其最佳退火温度.

关键词：大叶石上莲、ISSR、正交设计、反应体系、引物筛选

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分类号：S339.1(作物遗传育种与良种繁育)

资助基金：国家自然科学基金委-广东省联合基金重点支持项目U1301213;广东省教育部产学研结合项目2010B090400263

在线出版日期：2017-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：24-29