瓜实蝇DNA甲基化的MSAP体系建立与优化

摘要：

瓜实蝇[Bactrocera cucurbitae (Coquillett)]是中国重要的蔬菜害虫,但其DNA甲基化研究尚未见报道。甲基化敏感扩增多态性是研究DNA甲基化的重要技术之一。通过对酶切反应、连接、 PCR扩增和引物筛选等条件优化,建立瓜实蝇MSAP反应体系,即：①20μL酶切体系中加入10 U的限制性内切酶与600 ng基因组DNA,于37℃酶切反应过夜；②20μL连接体系中加入T4连接酶1 U, HpaⅡ-MspⅠ-adapter接头50 pmol, EcoR I-adapter接头5 pmol,并于16℃反应12 h；③连接产物稀释后进行PCR预扩增和选择性扩增,再经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测结果。通过该体系筛选出适用于瓜实蝇基因组DNA甲基化多态性研究的6对引物；瓜实蝇MSAP体系为瓜实蝇的表观遗传学研究提供了技术支持。

关键词：瓜实蝇、DNA甲基化、甲基化敏感扩增多态性、表观遗传

所属期刊栏目：36

分类号：S186;Q963(农业生物学)

资助基金：国家科技支撑计划子课题No.2015BAD08B03。

在线出版日期：2016-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：37-43