10.3969/j.issn.1009-2196.2014.04.011
柱花草AFLP反应体系的建立与引物筛选
以柱花草奥克雷品种为材料,采用改良的CTAB法提取基因组DNA,对影响AFLP反应体系的主要因素进行了优化,建立了柱花草的AFLP反应体系。结果表明:20μL为最佳反应体系,酶切体系中DNA模板量为1000 ng,用5 U EcoR I 37℃酶切2 h、5 U Mse I 65℃酶切2 h效果最佳;分别取5μL酶切液、1μL T4连接酶(5μL/L)、1μL EcoR I接头、1μL Mse I接头、2μL缓冲液(T4DNA酶自带),于22℃下连接10 min效果最佳;预扩增体系中模板稀释15倍、 Mg2+浓度为0.75 mmol/L、 Taq酶用量为1 U、 dNTPs浓度为0.2 mmol/L、引物浓度为2 ng/μL效果最佳;选择扩增体系中模板稀释20倍、 Mg2+浓度为1.25 mmol/L、 Taq酶为1 U、 dNTPs浓度为0.225 mmol/L、引物浓度为0.4 ng/μL效果最佳。利用热研5号、奥克雷2个品种对8对引物组合进行筛选,筛选出46对引物组合,为利用AFLP标记对柱花草进行分子生物学研究及分子育种奠定基础。
柱花草、DNA AFLP、引物筛选
S541(饲料作物、牧草)
国家自然科学基金No.30960266; No.31160481;农业部热带作物种质资源利用重点开放实验室开放基金No.KFKT:201011。
2014-05-26(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共8页
46-52,69