波形蛋白过表达质粒pcDNA3.1b-Vim的构建及鉴定

摘要：

目的 以波形蛋白(vimentin)基因为靶基因,构建波形蛋白过表达质粒pcDNA3.1b-Vim.方法 在PC12H细胞中抽提RNA,进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),得到cDNA,设计引物将目的基因扩增并进行胶回收,将空载质粒pcDNA3.1b与目的基因片段进行双酶切(分别为EcoRI/XbaI)、连接,构建重组过表达质粒,转化到Top10感受态细胞,经氨苄青霉素筛选挑取阳性克隆,扩大培养,提取质粒,凝胶电泳鉴定并进行测序分析.结果 凝胶电泳鉴定及DNA测序分析显示重组质粒pcDNA3.1b-Vim构建成功.结论 成功构建波形蛋白过表达质粒pcDNA3.1b-Vim,为研究波形蛋白的生物学功能打下基础.

关键词：波形蛋白、pcDNA3.1b、质粒

所属期刊栏目：40

分类号：R346(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：浙江省科技计划项目2015C37105

在线出版日期：2019-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1453-1455