结直肠癌细胞株增殖诱导配体基因的克隆、表达及生物学活性分析

摘要：

目的 克隆结直肠癌细胞株增殖诱导配体(APRIL)基因,并测定APRIL胞外可溶性片段(sAPRIL)重组蛋白的生物学活性.方法 采用RT-PCR技术,从肿瘤细胞株总RNA扩增APRIL全长及其胞外可溶性片段(sAPRIL)编码基因,PCR产物直接克隆于pGEM-T载体.将sAPRIL亚克隆到原核表达载体pET101/D-TOPO○(R)中,阳性克隆经IPTG诱导,SDS-PAGE分析sAPRIL的表达,对表达的蛋白初步纯化后进行生物学活性检测.结果 RT-PCR扩增出一个753bpDNA片段,酶切和测序证实该片段为编码人sAPRIL的全长cDNA,将sAPRIL克隆到表达载体经诱导后发现在20kDa处多显示出一条条带,纯化蛋白进行初步活性测定显示其可以剂量依赖方式促进细胞的生长.结论 成功克隆了APRIL基因,并将其可溶性胞外区片段在大肠杆菌进行了表达.纯化的重组蛋白可促进细胞生长,为进一步进行April基因的功能研究及其开发和临床应用奠定了基础.

关键词：APRIL、基因克隆、基因表达

所属期刊栏目：33

分类号：R73;R44

资助基金：江苏省南通市政府社会发展基金资助S2008033

在线出版日期：2012-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1848-1850