10.16073/j.cnki.cjcpt.2023.19.02
周期蛋白依赖性激酶所介导的RBBP8磷酸化在同源性重组修复中的调控机制
目的 阐明周期蛋白依赖性激酶(CDK)所介导的RBBP8磷酸化在同源重组(HR)修复中的调控机制,并初步验证CDK抑制剂与聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂在胃癌中的合成致死效应.方法 通过蛋白质印迹法、免疫共沉淀(Co-IP)验证CDK对RBBP8-BRCA1蛋白复合体的调控作用;免疫荧光实验探究CDK介导的RBBP8磷酸化在HR修复途径中调控机制;MTS实验研究CDK抑制剂与PARP抑制剂对胃癌细胞生存活力的影响;Compusyn计算联合指数以验证CDK抑制剂与PARP抑制剂的协同效应.结果 蛋白质印迹法结果显示,胃癌细胞系AGS和N87细胞中磷酸化的RBBP8蛋白327位丝氨酸(RBBP8-S327)蛋白表达水平分别为0.37±0.02和0.75±0.05,提示CDK抑制剂可降低AGS及N87中RBBP8-S327的磷酸化水平,t值分别为25.66和5.50,P值分别为＜0.001和0.005.Co-IP结果显示,相对于NC组,CDK抑制剂组BRCA1蛋白水平为0.27±0.03,提示CDK抑制剂削弱了 RBBP8和BRCA1之间的蛋白质相互作用,t=28.27,P＜0.001.CDK抑制剂遏制了 DNA损伤发生后的双链断裂修复蛋白51(RAD51)核内聚集效应及损伤位点的复制蛋白A(RPA)焦点形成.MTS实验结果提示,AGS与N87细胞中,单药使用PARP抑制剂浓度＞1 μmol/L可明显抑制胃癌细胞系的生存活力,差异均有统计学意义,F值分别为1 702.0和184.4,均P＜0.001;PARP联合CDK抑制剂处理时,2 μmol/L的CDK抑制剂可显著增强不同浓度(0.010、0.100、1.000、5.000和10.000 μmol/L)PARP抑制剂对胃癌细胞活力的抑制作用,t值分别为7.27和10.11,均P＜0.001.二者的联合指数＜1.结论 CDK介导的RBBP8磷酸化及RBBP8-BRCA1蛋白复合体在HR修复中发挥了关键调控作用,CDK抑制剂联合PARP抑制剂在胃癌中具有潜在的合成致死效应.
胃癌、RBBP8、周期蛋白依赖性激酶抑制剂、同源重组修复、合成致死
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R735.2(肿瘤学)
国家自然科学基金81970496
2023-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
1146-1153
